布鲁氏杆菌狗狗会得吗？
不会，但猪、羊、牛等家畜会感染并成为传染源 布鲁菌病（布病）是由布鲁菌引起的人畜共患传染病，主要侵犯动物和人类。在全世界分布广泛，我国各地均有发生[1]。人主要通过接触患病动物的皮毛、分泌物、排泄物和产奶等传播；也可通过食用被污染的食品或饮用被细菌污染的牛奶而得病;还有极少数病例是由于直接接触患者的血液和脓液以及注射被感染菌的生物制品感染而得病[2-3]。 布鲁氏菌对外界的抵抗力较弱，一般加热60℃30分钟即可杀死，所以可经煮沸和蒸煮处理而杀灭病原菌 [4]。
临床上布鲁杆菌病多呈急性或亚急性发病，主要表现为发热、多汗、乏力、倦怠、肢体疼痛等症状，少数患者可见恶心、食欲减退、腹泻、腹痛等消化道症状。病情加重时患者会出现神经精神症状和关节疼痛加剧等症状，同时还会伴有肝脾、淋巴结肿大及白细胞减少等现象[5-7]。
目前，对布鲁氏菌病的治疗仍以抗菌药物治疗为主，且疗程较长（≥6个月），部分患者的临床症状可持续数年甚至更长的时间[8-9]。因此，研究一种能快速检测布鲁氏菌感染的诊断方法对于早期诊断和治疗该疾病有着重要意义。
一、 引言 免疫学检验是临床诊断和研究布鲁氏菌病的常用方法，具有操作简单、快速、灵敏度高等特点。目前常用的布鲁氏菌抗体检测技术主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(EnzymeLinkedImmunoSpotTest， ELSI S)、免疫荧光技术(IFAT)/间接免疫荧光技术 (Indirect Immunofluorescence Test， IF/I F)、补体结合试验(Complement Fixation Test ， CFT )、免疫过氧化物酶技术 (Immunoperoxidase Technique ， IPT) 和乳胶凝集试验(LatexAgglutination test ， LAT)[10]。其中， ELISA法是目前国内外最常用的免疫学检测方法之一，由于其特异性强、敏感性高、简便易行等特点而被广泛应用于临床标本中布鲁氏菌抗体的筛查与定性定量测定[11-15]。然而传统的ELISA方法检测布鲁氏菌抗体往往需要经过复杂的实验步骤才能得出结果，不利于现场快速检测。因此，开发出方便快捷的ELISA方法一直是人们研究的热点。
二、 材料与方法
2.1 试剂与仪器
2.2 样本采集与处理 取血清0.05 mL加入预热的含青霉素和链霉素各10 U/mL的Eppendorf管中，混匀后4℃过夜，12 000 r/min离心10 min取上清于新的Eppendorf管中—20 °C保存备用。
2.3 标准品的制备 根据中国兽药典收载的布鲁氏菌抗原标准品制作相应的稀释液，再将浓缩的抗原用上述稀释液分别配制成系列浓度1、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011 、1×1012 U/mL的标准溶液作为标准品，—20 °C保存备用。
三、 结果
3.1 不同包被浓度的反应结果分析 将不同包被浓度的BSA、HRP标记山羊抗人IgG、辣根过氧化氢底物和显色剂按照表1进行比例配制后，采用1：100稀释浓度的待检血清作阳性对照，1：100稀释浓度的生理盐水为阴性对照，分别进行加样反应，结果如图1所示：当包被浓度的抗体为5 μg/mL时，OD值最大，因此本实验选取5μg/mL作为最佳包被浓度。
3.2 最佳HRP标记山羊抗人IgG的工作浓度选择 根据图1的结果可以看出，随HRP标记山羊抗人IgG工作浓度的增加，OD值也在逐渐增大，但是当HRP标记山羊抗人IgG的倍数大于1：1 000时，OD值的增幅不明显而且背景出现明显升高现象，因此为了减小背景干扰和提高灵敏度，本实验选择HRP标记山羊抗人IgG倍数为1：1000。 3.3 最佳TMB底物的最佳工作浓度 对于TMB底物来说，当其浓度较低时，反应不够充分导致OD570值较小；而当浓度较高时，又会产生大量黄色物质影响观察检测结果。由图可知，随着TMB浓度的提高，OD570值也逐渐上升，但是TMB浓度达到0.5 mg/mL之后变化不大，此时O D570值为0.479左右。由于本实验采用酶标仪测定样品吸光度值，为了得到较好的结果，便于操作，故本文选用TMB最佳工作浓度为0.5mg/mL。
3.4 最佳酶标反应时间的选择 酶标反应时间在很大程度上影响着ELISA检测结果，过短则反应不够充分，过长则会消耗掉过多的底物和酶使结果不准确。从图2可以看到，当TMB底物与H2O2的酶促反应时间为5～10 min时，OD570直基本相同，都在0.85附近；随着时间的延长OD570值缓慢下降，这可能是因为酶标反应时间过长，底物和酶会被消耗殆尽引起的。根据实验结果，最终确定的最佳酶标时间为10 min。
3.5 最佳酶标反应温度和时间 本实验中TMB与HRP酶反应需要一定温度下才能进行有效催化。从图3可以得知，在不同的反应温度下，TMB的分解速度